RESUMO Foi desenvolvido um método eficiente de regeneração de plantas para Aspidosperma polyneuron a partir de culturas nodais de plântulas. Sementes maduras foram desinfestadas e os embriões germinaram em meio de cultura Woody Plant Medium (WPM). Segmentos nodais do epicótilo e hipocótilo retirados de plântulas de três semanas crescendo in vitro foram cultivados em meio WPM, suplementado com 6-benziladenina (BA) (2,5; 5,0 e 10 µM), isolado ou combinado com ácido indol-3-butírico (AIB) ou ácido α-naftalenoacético (ANA) (0,5 µM) durante o cultivo inicial e três subcultivos. Para indução de raízes, inicialmente, foram testados tratamentos-pulso de AIB (2,5; 5,0 ou 10 mM) por 15 minutos, seguidos de transferência para meio WPM, sem regulador de crescimento por cinco semanas. Plantas regeneradas foram transplantadas para bandejas contendo solo e substrato Plantmax® (3:1) e depois transferidas para sacos plásticos para aclimatização em casa de vegetação. Os explantes do hipocótilo apresentaram resultados superiores de regeneração de brotações e enraizamento, quando comparados com os do epicótilo. Os maiores números de brotações por explante (7-8) foram obtidos em meios de cultura, suplementados com 10 µM de BA, no terceiro subcultivo. Aadição de 0,5 µM de AIB ou ANA combinada com BAnão influenciou a regeneração de brotações. O tratamento-pulso de AIB (5-10 mM) por 15 minutos induziu 60% de enraizamento. As plantas regeneradas foram aclimatizadas e bem estabelecidas em casa de vegetação com 90% de sobrevivência, após três meses. Baseado nos resultados desse estudo, a micropropagação de Aspidosperma polyneuron a partir de plântulas cultivadas in vitro é viável e pode ser uma boa opção para conservação e propagação dessa espécie importante que está em extinção.

ABSTRACT In this study, an efficient method for regenerating plants from nodal cultures of seedlings was developed for Aspidosperma polyneuron. Mature seeds were surface-sterilized and embryos were germinated in Woody Plant Medium (WPM). Epicotyl and hypocotyl nodal segments, excised from 3-week-old in vitro-grown seedlings, were cultured in WPM medium supplemented with 6-benzyladenine (BA) (2.5, 5.0, and 10µM), alone or combined with indole-3-butyric acid (IBA) or α-naphthaleneacetic acid (NAA) (0.5 µM) for culture initiation and three subcultures. For root induction, IBA (2.5, 5.0, and 10 mM) pulse treatments (15 minutes) were initially applied, followed by transfer to growth regulator-free WPM for five weeks. Regenerated plants were first transplanted to trays containing soil and Plantmax® substrate (3:1) and later to polyethylene bags for acclimatization in a greenhouse. Hypocotyl explants exhibited superior shoot regeneration rate and rooting percentages compared with those of epicotyl explants. The highest numbers of shoots per explant (7−8) were obtained at the third subculture when using the culture medium supplemented with 10 µM BA. When combined with BA, the addition of 0.5 µM IBA or NAA did not affect the regeneration of shoots. An IBA pulse treatment of 5−10 mM for 15 minutes induced 60% of rooting. The regenerated plants were acclimatized and successfully established in a greenhouse, with a 90% survival rate observed after three months. Based on the results of this study, the micropropagation of Aspidosperma polyneuron from in vitro seedlings is feasible and could be a useful tool for the conservation and propagation of this important endangered species.

Considering the necessity of Acrocomia aculeata propagation for large-scale production, the aim of this study was to establish a somatic embryogenesis protocol using the thin cell layer (TCL) technique. Aerial parts of in vitro plants were transversally cut at the base into eight TCLs and placed in a culture medium for callus induction. The induction medium was composed of Y3 salts and Morel´s vitamins and supplemented with 150, 300 or 600 μM picloram. After 12 weeks the calli were transferred to a medium supplemented with BAP or 2-iP (12.5 or 25 μM). After 18 weeks, the somatic embryo clusters were transferred to a conversion medium (plant growth regulator-free medium). Primary callus induction rate was higher in the first three TCLs and in media containing 150 or 300 µM picloram. The best maturation results were obtained in medium containing 12.5 μM 2-iP or 12.5 μM BAP. Few somatic embryos converted into plants. The histological analyses showed that callus induction started adjacent to vascular bundles after two days of culture, and somatic embryos arose in the periphery of nodular calli. This study showed that the TCL embryogenesis protocol is promising for in vitro multiplication of A. aculeata.

O presente trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de micropropagação de Pinus taeda L. Brotações apicais de plântulas de cinco dias de germinação, de diferentes genótipos (F27, B05 e PC) foram cultivadas em meio de cultura WV5, acrescido de 44 µM de 6-benzilaminopurina (BAP) e de 0,05 µM de ácido α-naftalenoacético (ANA) durante 14 dias, seguido de quatro subcultivos para meio sem reguladores de crescimento. Explantes foram seccionados em brotações apicais e segmentos nodais para a multiplicação. Foram testados comprimentos diferentes dos explantes, concentrações de BAP e períodos de cultivo. O enraizamento foi induzido em meios de cultura WV5/2, WV3/2, GDm/2 e ágar-água, acrescidos de 2,68 µM de ANA e 0,44 µM de BAP, pelo período de nove dias, seguido de subcultivo para as mesmas formulações, sem reguladores por quatro semanas. Verificou-se que o genótipo influenciou a formação de brotações e enraizamento. O comprimento de 1,0 cm é recomendado para os segmentos nodais produzirem o maior número de brotações axilares. Para brotações apicais, os explantes de 0,5 cm cultivados em meio de cultura WV5 apresentaram melhores resultados de alongamento. O melhor período de subcultivo foi oito semanas, tanto para os segmentos nodais como brotações apicais. A maior percentagem de segmentos nodais com brotações (99,2%) e o maior número médio de brotações por explante (4,0) foram obtidos com o genótipo F27, em meio de cultura contendo 2,5 µM de BAP. Para brotações apicais, o melhor resultado para alongamento foi observado com explantes menores (0.5 cm) em meio de cultura WV5 (218,3%). A manutenção de microjardim clonal in vitro de brotações vigorosas foi obtida por dois anos em meio de cultura WV5, com subcultivos de oito semanas. O melhor resultado de enraizamento (55,6%) ocorreu com indução por nove dias em meio ágar-água com 2,68 μM de NAA e 0,44 μM de BAP. A aclimatização de mudas foi bem sucedida (85% de sobrevivência), de modo que foi estabelecido um protocolo de produção de mudas por micropropagação.

This work aimed to establish a micropropagation protocol for Pinus taeda L. Apical shoots from 5-day seedlings, of different genotypes (F27, B05 and PC), were cultured on WV5 medium supplemented with 44 µM 6-benzylaminopurine (BAP) and 0.05 µM α-naphtaleneacetic acid (NAA), for 14 days, followed by subcultures on growth regulator-free medium. Explants were sectioned into apical shoots and nodal segments for multiplication. Different lengths of explants, BAP concentrations and cultivation periods were tested. Rooting was induced on WV5/2, WV3/2, GDm/2 and agar-water culture media supplemented with 2.68 µM NAA and 0.44 µM BAP for nine days, followed by a 4-week subculture on growth regulator-free medium. It was verified that genotype influenced shoot formation and rooting. The length of 1.0 cm is recommended for nodal segment explants to obtain a high number of axillary shoots. For apical shoots, 0.5 cm explant and WV5 medium formulation allowed the best results for elongation. The best period of subculture was eight weeks, both for nodal segments and for apical shoots. The higher percentage of nodal segments with shoots (99.2%) and the higher average number of shoots per explant (4.0) were obtained with F27 genotype in medium culture containing 2.5 µM BAP. For apical shoots, the best result for elongation was observed for the shorter explants (0.5 cm) on WV5 culture medium (218.3%). The maintenance of in vitro clonal micro garden of vigorous shoots was obtained for two years of 8-week subcultures on WV5 culture medium. The best rooting rate (55.6%) was obtained when shoots were inoculated in agar-water medium with 2.68 μM NAA and 0.44 μM BAP for nine days. Plantlets were successfully acclimatized (85% of survival), so a micropropagation protocol was established.

RESUMO Ocotea porosa apresenta sementes com forte dormência tegumentar, comportamento recalcitrante, baixa germinação e irregularidade, o que dificulta a propagação natural. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de embriogênese somática para Ocotea porosa. Eixos embrionários zigóticos imaturos foram inoculados em meio de cultura WPM suplementado com 2,4-D (200 µM) combinado ou não com caseína hidrolisada ou glutamina (0,5 ou 1 g l-1) durante 90 dias. A embriogênese repetitiva foi induzida em meio contendo 2,4-D (22,62 µM) combinado com 2-iP (2,46 µM) seguido de transferência para meio de cultura com caseína hidrolisada ou glutamina (1 g l-1), durante 90 dias cada. A maturação dos embriões somáticos foi testada em meio de cultura contendo ANA (0,5 μM) e 2-iP (5, 10 ou 20 μM). A maior porcentagem de embriões somáticos induzidos (8,3%) foi observada em meio de cultura WPM contendo 200 µM de 2,4-D e 1 g l-1 de caseína hidrolisada e o desenvolvimento de embriões somáticos ocorreram de forma indireta. A embriogênese somática repetitiva foi promovida em meio de cultura WPM contendo caseína hidrolisada ou glutamina, no entanto, a caseína hidrolisada promoveu a manutenção da competência embriogênica por mais de dois anos. Na fase de maturação, houve baixa progressão dos embriões globulares para os estádios cordiforme e torpedo. Os diferentes estádios ontogenéticos de embriões somáticos de Ocotea porosa foram caracterizados pelo estudo histológico.

ABSTRACT Ocotea porosa seeds have strong tegument dormancy, recalcitrant behavior, low and irregular germination and that makes its natural propagation difficult. The aim of this study was to establish a protocol of regeneration of Ocotea porosa from somatic embryogenesis. Immature embryonic axes were inoculated on WPM culture medium supplemented with 2.4-D (200 µM) combined or not with hydrolyzed casein or glutamine (0.5 or 1 g l-1), during 90 days. The repetitive embryogenesis was induced on medium with 2.4-D (22.62 µM) combined with 2-iP (2.46 µM) followed by transfer to culture medium with hydrolyzed casein or glutamine (1 g l-1) during 90 days. The maturation of somatic embryos was tested in culture medium containing NAA (0.5 μM) and 2-iP (5; 10 and 20 μM). The highest percentage of somatic embryos induction (8.3%) was observed in WPM culture medium containing 200 µM 2.4-D and 1 g L-1 hydrolyzed casein and the development of somatic embryos occurred indirectly. Repetitive somatic embryogenesis was promoted in WPM medium containing hydrolyzed casein or glutamine. However, the culture medium containing hydrolyzed casein promoted the maintenance of embryogenic capacity for more than two years. During the maturity phase, there was a low progression of globular embryos to cordiform and torpedo stages. The different ontogenetic stages of somatic embryos of Ocotea porosa were characterized by histological studies.

A imbuia apresenta sementes recalcitrantes, com forte dormência tegumentar, irregularidade e baixa germinação, dificultando sua propagação natural. O objetivo deste trabalho foi avaliar a germinação in vitro de eixos embrionários de imbuia, testando o efeito de diferentes concentrações de sacarose, de carvão ativado e de formulações salinas para acelerar a produção de mudas. Eixos embrionários zigóticos foram inoculados em meio de cultura MS/2 contendo diferentes concentrações de sacarose (15, 30, 60 ou 90 g L-1), de carvão ativado (0, 1, 2 ou 3 g L-1) e diferentes formulações salinas (MS, WPM, MS/2 ou WPM/2). Os resultados indicaram que a adição de 15 g L-1 de sacarose foi insuficiente para promover a germinação dos eixos embrionários e as demais concentrações promoveram entre 45,5 e 59,4% de germinação. Com relação às formulações salinas, os melhores resultados foram obtidos com os meios de cultura MS e MS/2 obtendo-se 67,7 e 74,2% de germinação, respectivamente. A adição de carvão ativado favoreceu a germinação in vitro dos eixos embrionários, enquanto que na ausência de carvão ativado não ocorreu germinação e houve elevada porcentagem de oxidação. A germinação in vitro de imbuia é viável e pode ser obtida com eixos embrionários zigóticos maduros com a formulação salina MS/2, suplementada com 30 g L-1 de sacarose e 1g L-1 de carvão ativado.

Imbuia has recalcitrant seeds with strong tegumental dormancy, irregular and low germination, which impair natural propagation. The objective of this study was to evaluate the in vitro germination of imbuia embryonic axes by testing the effect of different concentrations of sucrose, activated charcoal and salt formulations in order to accelerate the production of plants. Zygotic embryonic axes were inoculated in MS/2 culture medium with different concentrations of sucrose (15, 30, 60 or 90 g L-1), of activated charcoal (0, 1, 2 or 3 gL-1) and in different salt formulations (MS, WPM, MS/2 or WPM/2). The results indicated that the addition of 15 g L-1 sucrose was not enough to promote germination of embryonic axes and the other concentrations promoted between 45.5 and 59.4% germination. The best results were observed with MS and MS/2 salt formulations obtained 67.7 and 74.2% of germination respectively. The addition of activated charcoal to the media favored the in vitro germination of zygotic embryonic axes, while oxidation of the embryo tissues occurred in media without activated charcoal and germination did not happen. The in vitro germination of imbuia can be achieved with the MS/2 salt formulation supplemented with 30 g L-1 sucrose and 1 g L-1 of activated charcoal.

A fase de pré-aclimatização pode ser utilizada para aperfeiçoar os protocolos de micropropagação e aumentar o rendimento na produção de mudas. Avaliou-se a influência da sacarose e níveis de densidade de fluxo de fóton (DFF) in vitro, na sobrevivência das mudas do porta-enxerto de videira 'VR043-43'(Vitis vinifera x Vitis rotundifolia), na fase de aclimatização. Microestacas obtidas de brotações in vitro foram cultivadas em meio de cultura QL suplementado 15, 30 e 45 g L-1 de sacarose. O experimento foi mantido em sala climatizada com temperatura de 25 ± 2ºC, fotoperíodo de 16 horas e DFF de 18 µmol m-2 s-1 ou 43 µmol m-2 s-1. As plantas foram transferidas para uma câmara de nebulização intermitente por 10 d e mantidas durante 20 d em casa de vegetação com irrigação manual. A altura das plantas foi influenciada pelas concentrações de sacarose, sendo a maior altura (5,0 cm) obtida com a concentração de 30 g L-1 de sacarose. A maior área foliar foi obtida com 31,3 g L-1 de sacarose na DFF de µmol m-2 s-1 (13,3 cm²). A ausência de sacarose no meio de cultura promoveu redução significativa na área foliar nas duas DFFs testadas. A matéria seca da parte aérea foi maior quando o meio de cultura foi suplementado com 30 ou 45 g L-1 de sacarose (17,5 e 16,7 mg por planta, respectivamente). Houve enraizamento das microestacas em todas as concentrações de sacarose testadas. Alta porcentagem de sobrevivência (100%) durante a aclimatização ex vitro foi obtida quando as brotações foram cultivadas no meio de cultura suplementado com 45 g L-1 de sacarose em ambas DFFs testadas.

The pre-acclimatization stage can be used to improve micropropagation protocols and increase the yield of produced plants. The influence of sucrose and photon flux density (PFD) levels on the acclimatization of in vitro-grown 'VR043-43' (Vitis vinifera x Vitis rotundifolia) grapevine rootstocks was evaluated. Rooted shoots were obtained from 4-week-old in vitro shoots cultivated in QL (Quoirin and Lepoivre, 1977) culture medium supplemented with 15, 30 and 45 g L-1 of sucrose. The experiment was kept in a 25 ± 2ºC growth room, under 16-h photoperiod and PFD of 18 µmol m-2 s-1 or 43 µmol m-2 s-1. Plants were transferred to an intermittent misting system greenhouse for 10 d followed by 20 d of once-a-day watering routine using a handheld hose. Plant height was influenced by sucrose concentration, and shoots produced on media supplemented with 30 g L-1 sucrose were the tallest (5.0 cm). The largest leaf area was obtained with 31.3 g L-1 of sucrose, under the PFD of 43 µmol m-2 s-1 (13.3 cm²). Absence of sucrose in the culture medium led to a significant reduction in leaf area at both PFDs. Shoot (aerial part) dry matter was largest when 30 or 45 g L-1 of sucrose (17.5 and 16.7 mg per plant, respectively) were used. Microcuttings rooted in all sucrose concentrations tested. The highest survival percentage (100%) during ex vitro acclimatization was obtained for shoots cultured in media supplemented with 45 g L-1 of sucrose under both PFDs tested.

Na fase de cultivo in vitro, as plantas são mantidas em ambiente com alta umidade relativa do ar, baixa luminosidade e trocas gasosas restritas, o que resulta em taxa de transpiração reduzida. Portanto, quando essas mudas são expostas ao meio ex vitro, sofrem estresse que pode causar a morte. O objetivo desse trabalho foi comparar a estrutura anatômica das mudas de Cymbidium 'Joy Polis' cultivadas ex vitro (planta matriz e aclimatizada) e in vitro e verificar se a estrutura anatômica das plantas in vitro influencia no processo de aclimatização. As plantas ex vitro foram mantidas em casa-de-vegetação, em vasos individuais com o substrato fibra de coco em pó combinada com fibra de coco, e as plantas in vitro foram mantidas em meio de cultura MS. Para a análise anatômica qualitativa foram coletadas amostras de folhas e raízes de plantas ex vitro e in vitro. As plantas aclimatizadas apresentaram estrutura morfoanatômica semelhante à da planta matriz. A estrutura anatômica das plantas in vitro não influenciou a sobrevivência das mudas durante a aclimatização devido à plasticidade fenotipica desse cultivar. As plantas de Cymbidium 'Joy Polis' possuem grande capacidade de aclimatização ao ambiente, sendo provavelmente este um dos fatores responsáveis pela sobrevivência de 100% das mudas.

During in vitro culture plants are kept in an atmosphere with high relative humidity, low light intensity and reduced gas exchange, resulting in low transpiration rates. Therefore, when these plants are exposed to ex vitro conditions, they suffer stress, which can induce mortality. The purpose of this study was to compare the anatomical structure of Cymbidium 'Joy Polis' plants from ex vitro (mother plant and acclimatized plants) and in vitro cultures and to verify if the anatomical structure of in vitro cultured plants affects acclimatization. The ex vitro plants were kept in a greenhouse in pots containing a mixture of coconut-fiber powder and coconut fiber. The in vitro plants were kept in MS culture medium. For the qualitative anatomical analysis, samples of leaves and roots were collected from ex vitro and in vitro plants. The acclimatized plants presented morphological and anatomical structure similar to the mother plant. The anatomical structure of in vitro plants did not affect plant survival during the acclimatization process, as this cultivar has great phenotypic plasticity. Cymbidium 'Joy Polis' plants have high capacity of adaptation to the environment and this characteristic is likely to be responsible for their survival rate of 100% during acclimatization.

A Cabralea canjerana (Vell.) Mart. (Meliaceae) (canjarana) é uma espécie arbórea nativa brasileira importante para fornecimento de madeira de boa qualidade. As sementes desta espécie não podem ser armazenadas por muito tempo e, por tanto, existe a necessidade do desenvolvimento de técnicas alternativas de propagação como a micropropagação. Neste trabalho, foram realizados experimentos de multiplicação utilizando segmentos nodais, retirados de plantas germinadas in vitro. Os segmentos foram inoculados em meio de cultura MS ou WPM, adicionado de 6-benzilaminopurina (BAP) e, ou, 2-isopenteniladenina (2-iP) nas concentrações de 2,5 ou 5 µM. Microestacas de rebrotas foram colocadas em meio de cultura MS/2, com a metade da concentração dos sais do meio MS, adicionado de ácido indol 3-butírico (AIB) (0, 2,5 e 5 µM). Após sete dias, foram transferidas para meio MS/2 sem auxina e na luz. Na fase de multiplicação, o meio de cultura MS foi mais adequado que o meio WPM. O segmento nodal, em presença de 2,5 µM de BAP, propiciou um dos melhores resultados, com uma taxa de multiplicação de 1,77 por mês, em meio de cultura MS. O enraizamento das microestacas oriundas de rebrotas foi de 87,5% em presença de 5 µM de AIB durante sete dias. A aclimatização foi realizada em casa de vegetação e proporcionou 90% de sobrevivência das mudas após 30 dias. A micropropagação da canjarana a partir de segmentos nodais de mudas cultivadas in vitro é viável para a multiplicação dessa espécie.

Cabralea canjerana (Vell.) Mart. (Meliaceae) ("canjarana") is a native tree of economic importance in Brazil. The storage of seeds is of short duration and it is therefore necessary to establish a protocol for micropropagation of this species. In this work, multiplication experiments were carried out using nodal segments, excised from in vitro germinated plants. The segments were inoculated in MS or WPM culture medium, supplemented with 6-benzylaminopurine (BAP) and/or 2-isopentenyladenine (2-iP) at 2.5 or 5 µM. Micro-cuttings were taken from new shoots developed from the seeds and used in a rooting experiment using a culture medium with half-strength MS medium (MS/2) supplemented with indolbutyric acid (IBA) (0, 2.5 and 5 µM). After 7 days in this medium, they were transferred to MS/2 medium without auxin under light. During the multiplication phase, the MS culture medium was more suitable for the multiplication of C. canjerana than WPM medium. The nodal segments cultured in the presence of 2.5 µM BAP showed the best result, with a multiplication rate of 1.77 per month on MS medium. The rooting of the microcuttings was 87.5% when they were kept in the presence of 5 µM IBA for 7 days. An acclimatization rate of 90% was achieved after 30 days in the greenhouse. In conclusion, the micropropagation of C. canjerana from nodal segments of plantlets is possible for this species.

A escolha adequada do meio de cultura é um fator relevante para a micropropagação, devido ao importante papel dos componentes minerais no processo de regeneração. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito dos meios de cultura MS/2, NN, WPM, QL e C2D, no cultivo inicial, a partir de segmentos nodais e em três subcultivos do porta-enxerto de videira "VR043-43". O delineamento experimental foi em blocos casualizados com quatro repetições. Os meios de cultura não tiveram efeito significativo sobre o número de brotações por explante no cultivo inicial e nos subcultivos. No primeiro subcultivo, os melhores resultados para o número de microestacas por explante inicial foram encontrados com os meios de cultura MS/2, QL e C2D, e, no segundo subcultivo, não houve diferenças estatísticas entre os tratamentos. A altura das brotações no cultivo inicial, no primeiro e no segundo subcultivos aumentou com o meio de cultura QL. No primeiro subcultivo, 83,3% das brotações enraizaram no meio de cultura QL. Para o cultivo inicial do porta-enxerto de videira "VR043-43" in vitro, a partir de segmentos nodais e para a multiplicação das microestacas, o meio de cultura QL apresenta-se adequado para o desenvolvimento das brotações.

The right choice of the culture medium is an important factor for micropropagation mainly because of the mineral component role during the regeneration process. This research was aimed at evaluating the effect of the MS/2, NN, WPM, QL and C2D culture medium on the establishment of nodal segments and multiplication of grapevine rootstock 'VR043-43'. The data was analyzed according to a randomized complete block design with four replications. The culture medium had no significant effect on the number of shoots per explant in the initial culture and subcultures. For the first subculture, the best number of microcuttings per initial explant was obtained using the MS/2, QL and C2D culture medium. For the second subculture no statistical differences were observed between treatments. Shoot height in the initial, first and second subcultures increased with QL culture medium. For the first subculture, 83.3% of rooting was found on shoots growing in the QL culture medium. The best results of shoot development for the initial culture of the grapevine rootstock of 'VR043-43' in vitro using nodal segments and its microcuttings multiplication were obtained with the QL culture medium.

Pinus taeda L., a principal espécie florestal plantada no Sul do Brasil, tem sua madeira usada como matéria-prima em serrarias, laminadoras e indústrias de aglomerado, MDF, celulose e papel. Devido à sua grande importância econômica, existe interesse no desenvolvimento de técnicas de propagação vegetativa que permitam a clonagem massal de mudas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da idade das mudas (60, 90, 120 e 150 dias) e das quatro estações do ano no enraizamento de miniestacas de P. taeda. Miniestacas de 5 cm foram confeccionadas a partir de ramos herbáceos e tratadas com solução de Captan® 0,1%. Seu plantio foi realizado em tubetes com substrato Mecplant® na camada inferior e 2 cm de vermiculita na porção superior. As miniestacas foram mantidas em casa de vegetação durante 120 dias, com temperaturas entre 15 e 25 ºC e umidade relativa do ar em torno de 90%. Avaliaram-se as porcentagens de miniestacas enraizadas, sobreviventes e mortas, o comprimento das três maiores raízes e o número e massa seca de raízes formadas por miniestaca. A idade das mudas influenciou o enraizamento, e a maior porcentagem (85%) foi obtida com mudas mais jovens (60 dias). O inverno mostrou-se o período mais favorável para a coleta das miniestacas.

Pinus taeda L. is the main forest tree species planted in Southern Brazil and its wood is used for sawlogs, venner, particle board, medium density fiberboard (MDF), pulp and paper industries. Due to its high economic importance, interest exists in developing techniques for vegetative propagation aiming at mass multiplication. The purpose of the present work was to evaluate the effect of the age of seedlings used as mother plants (60, 90, 120 and 150 day-old) and of the four seasons of the year on rooting of P. taeda minicuttings. Minicuttings of 5 cm in length were collected from herbaceous branches and treated with Captan® solution (0.1%). Minicuttings were planted in plastic tubes containing Mecplant® substrate overlayered with vermiculite. Minicuttings were maintained in greenhouse for 120 days with temperature between 15 and 25ºC and 90% relative humidity. The parameters evaluated were: percentage of rooted, surviving and dead minicuttings, length of the three larger roots, number of roots and minicutting dry weight. Seedling age influenced the rooting percentage, and the highest value (85%) was obtained with 60-day-old seedlings. The winter was the most favorable season for the collection of minicuttings.

A micropropagação é uma técnica que possibilita a propagação massal de plantas de interesse econômico. Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito de 6-benzilaminopurina (BAP) e cinetina (CIN) na multiplicação do porta-enxerto de videira 'VR043-43'. O isolamento foi realizado em meio de cultura QL, suplementado com BAP ou CIN, nas concentrações de 0; 2,5; 5,0 e 10,0µM. Os subcultivos foram realizados a cada 45 dias. O número de brotações por explante aumentou ao longo dos subcultivos com BAP. Esse efeito não foi observado com a CIN, que obteve resultado semelhante ao da testemunha (1,0 brotação/explante). As concentrações de 5,0 e 10,0 µM de BAP promoveram o maior número de brotações, porém com redução da altura. A concentração mais elevada de CIN (10,0 µM), também teve efeito negativo na altura das brotações, assim como no número de folhas por brotação. A formação de calo (100%) foi observada com BAP e CIN em todas as concentrações, e na ausência de citocinina não houve a formação de calo. A citocinina BAP reduziu a formação de raízes, que foi de 100% com a CIN e a testemunha.

The micropropagation is one technique that makes possible the massal propagation of plants of economic interest. The objective of this work was to evaluate the effect of 6-benzilaminopurina (BAP) and kinetin (KIN) in the multiplication in vitro of the grapevine rootstock 'VR043-43'. The isolation was carried through in culture medium QL, supplemented with BAP or KIN, in the concentrations of 0; 2,5; 5,0 and 10,0µM. The subcultures had been carried out each 45 days. The number of shoots per explant increased along with the subcultures with BAP. However this effect was not observed with the KIN that it got resulted similar to the one of the cytokin-free (1,0 shoot/explant). The concentrations of 5,0 nd 10,0 µM of BAP had promoted the biggest number of shoots with reduction of the height. The highest concentration of KIN (10,0 µM) also had negative effect in the height of the shoots, as well as, in the number of leaves per shoot. The callus formation (100%) was observed with BAP and KIN in all the concentrations, and in the cytokinin absence it did not have the callus formation. Cytokinin BAP reduced the formation of roots that was of 100% with the KIN and cytokinin-free.

O presente trabalho teve como objetivo o estabelecimento de um protocolo de regeneração in vitro de mudas de Aspidosperma polyneuron (peroba-rosa), a partir de segmentos nodais de material juvenil. Brotações apicais de mudas de dois anos de idade foram desinfestadas com 0,25% de hipoclorito de sódio ou 0,05% de cloreto de mercúrio, durante 10 min, visando ao estabelecimento de culturas assépticas. A indução de brotações múltiplas foi realizada em meio de cultura WPM, suplementado com BAP, ZEA ou CIN (2,2-8,8 miM), no cultivo inicial e nos dois subcultivos subseqüentes. Para indução de brotações alongadas foram testadas as combinações de fitorreguladores: 2,25 miM de BAP, ZEA ou CIN, associadas com 1,25 miM de AIB. A indução de raízes foi avaliada com tratamentos em soluções de AIB (2,5-10 mM), durante 5 ou 15 min. As mudas enraizadas foram transplantadas para casa de vegetação. A desinfestação das brotações apicais foi eficiente com 0,25% de NaOCl ou 0,05% de HgCl2, durante 10 min, obtendo-se 72,89 e 84,10% de sobrevivência, respectivamente. As maiores taxas médias de regeneração de brotações axilares (4 a 5) foram obtidas em meio de cultura suplementado com ZEA ou BAP (4,4-8,8 miM), após o segundo subcultivo. Concentrações mais reduzidas de BAP ou ZEA (2,25 miM) e 1,25 miM de AIB proporcionaram, em média, três brotações mais alongadas (1,5-2,5 cm de comprimento). Tratamentos com soluções de 10 mM de AIB, durante 15 min, foram eficientes na indução de raízes (80%), e as mudas transplantadas apresentaram taxas de sobrevivência superiores a 90% em casa de vegetação.

The objective of the present work was to establish a micropropagation protocol of Aspidosperma polyneuron from juvenile material. Apical shoots from two years old seedlings were collected in a greenhouse and sterilised with NaOCl or HgCl2 to establish aseptic cultures. Multiple shoots induction was evaluated in WPM medium, supplemented with BAP, ZEA or KIN (2.2 - 8.8 muM) in initial culture and two subsequent subcultures. The elongation of shoots was tested with growth regulators combinations: 2.25 muM of BAP, ZEA or KIN with 1.25 muM of IBA. IBA treatments (2.5; 5.0 and 10 mM) were tested with 5 and 15 minutes to induce roots. Plantlets were planted in a greenhouse. Efficient apical shoots sterilization was achieved with NaOCl (0,25% - 10 minutes) or HgCl2 (0.05%-10 minutes); survival rates were 72.89% and 84,10%, respectively. Apical shoots induced 4-5 axillary buds in WPM culture medium, containing ZEA or BAP (4.4 - 8.8 muM) following two subcultures. Reduced concentrations of ZEA or BAP (2.25 muM), combined with IBA (1.25) produced elongated shoots. IBA treatment (10 mM) during 15 minutes induced higher rooting percentages (80%). Plantlets planted in a greenhouse showed higher survival rates (90%).

RESUMO O presente trabalho objetivou estabelecer um protocolo para obtenção de culturas assépticas de Aspidosperma polyneuron visando à regeneração in vitro de mudas dessa espécie. Brotações apicais de mudas de dois anos de idade foram coletadas em casa de vegetação e desinfestadas com hipoclorito de sódio (NaOCl) ou cloreto de mercúrio (HgCl2) visando ao estabelecimento de culturas assépticas. Os tratamentos testados com NaOCl foram: solução 0,125 ou 0,25%, durante cinco ou dez minutos e com HgCl2: 0,025; 0,05 ou 0,1%, durante cinco ou dez minutos e em todas as estações do ano. As avaliações das percentagens de necrose, contaminação fúngica, contaminação bacteriana e de sobrevivência foram feitas após três semanas. Os resultados revelaram que o tratamento com solução de NaOCl a 0,25%, durante 10 minutos, resultou em 70% de sobrevivência para brotações apicais, independente da época do ano (verão e outono). O HgCl2 foi mais eficiente que o NaOCl na desinfestação de brotações apicais de peroba-rosa, sendo recomendado o tratamento de 0,05% de HgCl2, durante 10 minutos (84,10% de sobrevivência). Em todas as estações do ano, foram estabelecidas culturas assépticas, contudo, os melhores resultados foram obtidos na primavera e verão.

ABSTRACT The objective of the present work was to obtain aseptic cultures in order to establish a micropropagation protocol of Aspidosperma polyneuron from juvenile explants. Apical shoots from twoyear-old seedlings were collected in a greenhouse and disinfected with sodium hypochlorite (0.125 or 0.25%) or mercuric chloride (0.025, 0.05 or 0.1%), during 5 or 10 minutes and at different seasons of the year. Necrosis, bacterial and fungal contamination percentages and survival rates were evaluated after three weeks. It was showed that NaOCl 0.25% solution, during 10 minutes resulted in 70% of survival and disinfection of apical shoots, independent of the season of the year (summer or autumn). HgCl 2 was more efficient than NaOCl in the disinfection of apical shoots, therefore 0.05% HgCl 2, during 10 minutes was recommended (84.10% of survival). Aseptic cultures were established in all seasons of the year, but better results were obtained in spring and summer.